2018
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数字PCR在移植排斥监控中的应用 器官移植是治疗器官衰竭的最佳方法之一，对于末期器官病变患者更是唯一有效的治疗方式。常见移植器官包括心脏、肺脏、肝脏、肾脏、胰脏和小肠。据统计，2017年我国实施器官移植手术超过1.6万例，随着公民逝世后自愿捐献例数不断增加，器官移植手术量呈逐年上升趋势，移植手术的质量也大幅提升。然而，移植排斥反应仍然是这一领域的一大难题，是导致移植手术失败的重要原因。器官移植后，由于供、受者之间的组织抗原不同，移植物刺激受者的免疫系统发生免疫应答，引发排斥反应。树突状细胞（DC）在免疫应答过程中提呈抗原，激活受体T细胞，T细胞对同种异体移植物识别并活化，介导免疫应答，通过多种机制破坏、杀伤移植物（图一）。图一：移植排斥反应机制（来源：Ayala-García MA, et al. (2012) “The Major Histocompatibility...
2017
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数字PCR 数字PCR即digital PCR（dPCR)，它是一种核酸分子绝对定量技术。数字PCR与传统定量 PCR（qPCR）技术不同，数字 PCR 采用绝对定量的方式，不依赖于标准曲线和参照样本，直接检测目标序列的拷贝数，检测极限可达单拷贝，具有比传统 qPCR 更加出色的灵敏度、特异性和精确性。 ddPCR（droplet digital PCR）是基于微液滴平台的数字PCR技术，拥有比其他数字PCR技术更高的分辨率和检测灵敏度。 ddPCR工作原理是：首先通过微液滴生成仪将含待测样品均分到大量直径为微米级的“油包水”微液滴中，体积为皮升级，数量为十万到百万级。由于微液滴数量足够多，微液滴之间被油层相互隔离，因此每个微液滴相当于一个“微型PCR孔”，微液滴中只含有待测样品的单分子DNA；针对这些单分子DNA在每个微液滴中进行PCR扩增反应，完成荧光标...
2018
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数字PCR在靶向测序建库中的应用二代测序技术，也称为高通量测序技术，一次可对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定。靶向捕获测序技术是二代测序技术衍生出来的一个重要分支，只对感兴趣的目标基因进行扩增测序，能够更高效经济地测定DNA序列。靶向捕获建库是测序流程中的重要环节，目前具有代表性的方法是罗氏Nimblegen序列捕获芯片、安捷伦Sureselect基于液相靶向捕获系统和基于多重PCR扩增的基因捕获系统1。目前常用的靶向文库制备方法多样，但在捕获均一性、中靶效率、操作流程、检测成本等方面需要改进。基于PCR扩增引物设计的灵活性及简单的操作流程，多家公司开发了多重PCR扩增的捕获体系。多重PCR扩增体系通过多对引物对基因组进行扩增捕获，但随着引物增加时，扩增引物之间或引物与微量扩增模板之间的相互作用会降低扩增效率。微液滴数字PCR作为一种新兴的检测技术，通过数以万计的微液滴将扩增模板分散...