学术文章丨新羿数字PCR首次解密EB病毒与玻璃体视网膜淋巴瘤的关联

发布日期：2025-12-19

近日，复旦大学附属华山医院检验科关明主任团队联合清华大学郭永教授团队，在《Virologica Sinica》合作发表最新研究成果，首次通过系统性的基因组学分析，明确了Epstein-Barr病毒（EBV）在罕见且高侵袭性的玻璃体视网膜淋巴瘤（VRL）中的临床预后价值与特异性基因组变异图谱。本研究应用了新羿生物的高灵敏度微滴数字PCR（dPCR）技术，为精准量化患者玻璃体液中极低浓度的EBV DNA提供了可靠方法，为这种罕见病的精准诊断与病因学研究提供了新证据。

研究背景

玻璃体视网膜淋巴瘤（VRL）是一种罕见的眼内弥漫大B细胞淋巴瘤，与原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）关系密切，预后极差。尽管EBV被证实与多种淋巴增殖性疾病相关，但其在VRL中的流行病学、致病机制及病毒基因组特征尚不明确。VRL诊断依赖玻璃体活检，但样本量极少，传统核酸检测灵敏度不足，难以精准捕捉EBV信号；临床无法通过EBV感染状态判断VRL患者预后，也缺乏能区分VRL与其他淋巴瘤的特异性标志物。为破解这些难题，研究团队选择dPCR作为核心检测技术——凭借其绝对定量、高灵敏度、抗干扰性强的优势，即使在微量玻璃体样本中，也能精准量化EBV DNA，为后续研究奠定基础。

研究目的

• 用dPCR结合EBV特异性免疫荧光检测，明确EBV在VRL患者玻璃体中的阳性率；

• 对比EBV阳性与阴性VRL患者的临床数据（如无进展生存期），分析EBV感染与VRL预后的关联；

• 通过EBV靶向测序，解析VRL来源EBV的基因组聚类特征及疾病特异性突变。

研究方法

研究纳入复旦大学附属华山医院2017-2024年间53例VRL患者的玻璃体样本，所有患者均为HIV阴性、无免疫缺陷，中位发病年龄60岁（34-76岁），其中43%为男性。用dPCR定量EBV DNA（线性范围10-10⁶IU/mL，R²>0.99）；免疫荧光检测EBV在细胞学中的定位，对5例EBV高载量（>10⁴copies/mL）样本进行全基因组测序，分析病毒进化特征与突变热点。

研究结果

※ 近三成VRL患者EBV阳性，且病毒直接感染肿瘤细胞

dPCR检测显示，53例VRL患者中，15例（约28%）为EBV阳性，提示EBV在VRL中可能扮演更重要角色。

更关键的是，EBV特异性免疫荧光检测结果证实：EBV编码的核抗原（EBNA1）与B细胞标志物（CD20）在肿瘤细胞内共定位，直接证明EBV并非“旁观者”，而是直接感染眼内肿瘤细胞，为其致癌作用提供了证据。

图1 玻璃体液样本中EBV的检出

※ EBV阳性与不良预后显著相关

回顾性临床数据分析显示，与EBV阴性患者相比，EBV阳性患者的无进展生存期显著缩短，表明EBV是预后不良的风险因素。

图2 比较EBV阳性与EBV阴性玻璃体视网膜淋巴瘤（VRL）患者生存期的分析

※ 发现VRL特异的EBV基因组谱系与变异

本研究首次对VRL来源的EBV进行了全基因组靶向测序。系统进化分析表明，所有VRL来源的EBV基因组均聚集在一个独立的进化分支上。通过比较基因组学分析，研究团队进一步鉴定出多个仅在VRL群体中富集的非同义突变（如LMP1 S229T, BPLF1 G2248R）。

※ 发现VRL专属EB病毒突变，或成诊断标志物

通过对比VRL、原发性中枢神经系统淋巴瘤、淋巴结弥漫性大B细胞淋巴瘤的EBV突变谱，研究团队发现2个仅在VRL中存在的特异性突变：

• LMP1-S229T：LMP1是EBV最关键的致癌蛋白，可调控肿瘤细胞增殖与抗凋亡，该突变可能增强其致癌活性；

• BPLF1-G2248R：BPLF1参与EBV免疫逃逸，突变或帮助病毒躲避眼内免疫监视，促进肿瘤定植。

总结与讨论

本研究通过多组学方法，确立了EBV在VRL中的致病角色，并揭示了其独特的基因组特征，可作为这一罕见疾病的诊断生物标志物。这项研究不仅是数字PCR技术首次用于眼内玻璃体样本检测，更从临床与基础层面为VRL诊疗带来突破，数字PCR技术的高灵敏度与可靠性对于在成分复杂的玻璃体液中准确评估EBV载量至关重要。

原文链接：

https://doi.org/10.1016/j.virs.2025.09.007

●关于新羿生物●

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