高通量测序技术中一个重要环节就是文库构建,随着技术的不断完善,建库方法正朝着低成本、高通量和低起始量的方向发展。其中靶向测序是一种更加经济高效的方法,针对于疾病相关基因提供经济高效、准确、易于解读的结果,识别低频等位基因变异;鉴定诱发性新突变或遗传性突变。 目前有两种主要的靶向测序建库方法:靶向富集和扩增子方法。1)靶向富集:生物素标记探针在杂交过程中将目标区域捕获,再通过磁沉降将其分离。2)扩增子测序:使用高度特异的寡核苷酸引物将目标区域扩增并纯化。 以上两种方法在均相溶液中,当靶向探针或扩增引物增加时,均会由于探针之间或扩增引物之间的相互影响,而影响捕获或扩增的效率,而如果将其分散到大量微液滴中,模板将可以单分子方式分配到液滴中,从而降低探针及引物间相互作用,提高捕获及扩增效率,最终可达到以更少的模板量,得到更多的有效测序数据的目的。使用Drop Maker M1样品制备仪和微流控测序建库耗材试剂盒可支持在建库过程中将扩增体系分散到液滴中,提高捕获或扩增效率。工作流程:1)提取样本中核酸并纯化;2)生成液滴,PCR扩增;3)破液滴并PCR产物纯化;4)以纯化产物为模板,二次PCR加测序接头;5)上机测序及数据分析。应用方向:靶向癌症测序靶向癌症测序针对与癌症发生、发展、靶向治疗、预后等相关的肿瘤基因进行靶向富集,然后通过高通量测序,对癌症的诊断和治疗提供帮助,与全基因组测序相比较,靶向癌症测序可以降低成本,并更快完成检测。因为评估有限个基因,靶向癌症测序能达到更深的覆盖度,从而获得更高的分辨率来准确检出稀有肿瘤亚克隆中的变异。产品特点:1)使用液滴进行模板分散,提高多重扩增效率,基因Panel可达100个基因;2)高特异性,高富集效率和扩增均匀性 ;3)操作简单,减少磁珠分选步骤;4)检测灵敏度高,重复性好;5)超低的建库起始DNA (10...